印漬術（Blotting）

印漬術（Blotting）
國立臺灣師範大學生命科學系103級莊仁奕

在分析 DNA 片段、RNA 或蛋白質時，可以透過該物質的物理性質（如大小）與化學性質（如極性）來達到分離的目的。膠體可以提供適當的孔隙大小、極性，當分析物在適當的電壓電流驅動下，其組成物會因為大小、極性等不同的物理、化學特性，而在膠體中移動上有先後快慢的差別，此種分析技術稱為膠體電泳（gel electrophoresis）。

DNA、RNA 因為含有大量磷酸根而帶負電，故將其放在靠近電流的負極處，DNA、RNA 在電流驅動下會往電流的正極移動。同理，蛋白質亦如是，但因為蛋白質有二級三級結構，分子量小的蛋白質可能折疊成複雜結構而無法順利進行電泳，因此，如需利用電泳來分析蛋白質分子量大小時，需利用特殊的膠體與溶液，使蛋白質在電泳時維持著一級結構以利分析。

以電泳法分離而得到的分析物，再進行下個步驟–印漬，就可以達到辨認的目的。印漬術是指將 DNA 片段、RNA 或蛋白質從某種膠體上轉漬到某種膜上。因為膠體本身較為脆弱且無法附著其他外加化學物質，使得後續的實驗步驟進行困難，因此將膠體上的物質透過外加的電壓電流轉移至膜上，以利後續實驗步驟的進行。

分析物轉漬到膜上之後也不算是穩如泰山，還需經過一些步驟強化分析物質與膜的連結，並去除膜上帶有其他物質的可能性，完成之後便能加入特定的探測物來偵測標定分析物中是否含有特定的目標物質。

早期多使用帶放射性的物質進行探測標定，現在多改用其他非放射性物質進行標定，例如加入帶有螢光顯色的抗體，針對特定蛋白質進行標定；或加入特定序列且帶有螢光之 DNA 測定目標 DNA 是否存在。因為待測定物的性質不同，適用的印漬技術也隨之不同。例如：測定 DNA 的南方印漬術（Southern blotting）、測定蛋白質的西方印漬術（western blotting）、測定 RNA 的北方印漬術（northern blotting）。除此之外，還有許多針對不同待測物的印漬術，這些印漬術也都有以上分離、轉漬、分析三個步驟，其餘差別在於所使用的膠體、膜和檢測物不同。

南方印漬技術是最早的印漬技術，由愛丁堡大學的 Edwin Southern 於 1975 年所發明，用於檢測 DNA，因其姓氏 Southern 而得名。緊接著是 1977 年史丹佛大學的 George Stark 團隊，發明了檢測 RNA 的北方印漬技術。在這之後有三個團隊進行研究，針對技術上的改良後，產生檢測蛋白質的西方印漬術。

參考資料：

• David L. Nelson, Michael M. Cox. Lehninger Principles of Biochemistry (fifth edition).