生物科技

超多能分化性(Pluripotency) -上

超多能分化性(Pluripotency) -上
臺中市雙十國中自然領域王淑卿教師

隨著科技與資訊的發達,並受後現代主義(postmodernism)質疑約定俗成的形式,包容多樣性差異、鼓勵創新和前瞻未來的多元文化思潮之影響下,個性化、特殊化、能滿足個人需求的客製化(customisation)時代因應潮流而生,不僅時尚、企業、食品、運動、3D列印(3D printing)科技、甚至健康和醫療,都可為個人量身打造最適合自己的商品與服務,為病患個人化醫療的再生醫學(regenerative medicine)幹細胞研究因應而興起。

  •    2012年諾貝爾生理醫學獎-誘導式超多能幹細胞(induced pluripotent stem cell,iPS)

2012 年諾貝爾生理醫學獎由英國劍橋大學教授戈登(John Gurdon)與日本京都大學教授山中伸彌(Shinya Yamanaka)共同獲得(圖一),因為發現成熟的細胞可以被重新編程為具有超多能分化性(pluripotent)。

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圖一 2012年諾貝爾生理醫學獎得主:左-戈登(John Gurdon)1933年出生於英國狄潘後市(Dippenhall);右-山中伸彌(Shinya Yamanaka)1962年出生於日本大阪市(Osaka)。 (圖片來源: http://www.nobelprize.org/nobel_prizes/medicine/laureates/2012/gurdon-facts.html http://www.nobelprize.org/nobel_prizes/medicine/laureates/2012/yamanaka-facts.html)

探針雜合

探針雜合 (Probe hybridization)
國立臺灣師範大學生命科學系103級莊仁奕

在分子尺度下的世界,要分辨一段DNA或RNA的序列為何,最好的辦法就是透過DNA或RNA雙股鹼基對互補的特性,將未知的樣本透過加熱、鹼處理而變性為單股,加入已知序列的DNA或RNA與樣本進行配對,此種帶有螢光或放射物質的已知序列稱為探針,配對成功的樣本就會被探針的螢光或放射物質顯現出來,這個方法就稱為探針雜合。

細胞色素 P450

細胞色素 (Cytochrome) P450
國立臺灣師範大學生命科學系研究助理林如愔

CytP450Oxidase-1OG2

圖片來源:維基百科

細胞色素P450最早於1955年在老鼠的肝臟細胞中發現,因為其與CO結合的還原態吸收光譜波長約在450 nm而得名。細胞色素P450是一個龐大的酵素家族,簡稱為CYP,主要負責有機受質的氧化作用。CYPs的受質包括了如脂質、類固醇荷爾蒙,以及一些外源性的物質,如藥物、有毒的化學物質等。藥物活性化與代謝主要都是由CYP這個酵素家族所負責的,大約囊括了生物體中此類代謝的百分之七十五。

CYPs所負責催化的典型反應為單-羥基化反應,此反應消耗NADPH作為能量與氫離子來源,反應後在受質上增加一個羥基並產生一單位水。其反應式如下:

RH + O2 + NADPH + H+ → ROH + H2O + NADP+

CYPs通常在電子傳遞鏈的末端作為氧化酵素,通稱為P450系統。CYPs廣泛存在於所有的生物甚至病毒中,已發現者超過18000種,然而,在大腸桿菌(E. coli)中卻未發現此類蛋白的蹤影。人類的CYPs大部分是膜蛋白(membrane-associated proteins),主要分布在粒線體內膜或是內質網上。

開放讀序框架

開放讀序框架 (Open reading frame)
國立臺灣師範大學生命科學系研究助理陶韻婷

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圖片來源:flickr用戶dullhunk

DNA由一長串的核苷酸組成,當細胞進行活動時,會啟動基因產生蛋白質。DNA上會產生蛋白質部分稱為open reading frame(ORF),其中每3個核苷酸(nucleotide)為一組密碼子,經轉錄(transcription)後產生訊息RNA(message RNA, mRNA),再將mRNA上的密碼子(codon)轉譯成胺基酸鏈(amino acid sequence),進而摺疊成蛋白質;此段ORF從起始密碼子(initiation codon)開始,起始密碼子在DNA上通常是ATG,但也有例外,直到終止密碼子(termination codon)之前結束,終止密碼子在DNA上通常是TAA、TAG或TGA。

利用生物資訊軟體尋找基因是相當重要的,可稱為基因預測(gene prediction)或開放讀序框架掃描(ORF Scan)。一段DNA在定序(sequencing)之後,每3個核苷酸為一組密碼子,對於一條長串鹼基序列即有3種分析找尋基因的可能性,而DNA為雙股螺旋,故有6種可能性,如圖一。依序尋找起始密碼子及終止密碼子,但是若此框架片段的密碼子小於50個,通常會被認為是無效的框架,無法轉譯成蛋白質。也就是說若找到一段DNA前有起始密碼子,後有終止密碼子,且長度超過50個密碼子,則此段DNA序列可能是一個基因。

DNA:  5’-GACACCATGGTGCACCTGACTCCTGAGGAGAAGGTCTGCCG-3’
可能性1:GAC ACC ATG GTG CAC CTG ACT CCT GAG GAG AAG GTC TGC CG
可能性2:G ACA CCA TGG TGC ACC TGA CTC CTG AGG AGA AGG TCT GCC G
可能性3:GA CAC CAT GGT GCA CCT GAC TCC TGA GGA GAA GGT CTG CCG

互補DNA:3’-CTGTGGTACC ACGTGGACTG AGGACTCCTC TTCCAGACGGC-5’
可能性4:CTG TGG TAC CAC GTG GAC TGA GGA CTC CTC TTC CAG ACG GC
可能性5:C TGT GGT ACC ACG TGG ACT GAG GAC TCC TCT TCC AGA CGG C
可能性6:CT GTG GTA CCA CGT GGA CTG AGG ACT CCT CTT CCA GAC GGC

圖一  尋找基因的6種可能性(ATG為起始密碼子)

然而,真核生物的基因體(eukaryotic genomes),包含人類基因體,有一些重要的特色,造成基因預測或開放讀序框架掃描的困難性增高。首先因為真核生物基因體的資訊過於龐大,有可能在基因聚集處找到的無效的open reading frame,看起來符合開放讀序框架的定義,卻無法合成出蛋白質。

找到培養人類脊髓細胞的條件了!

找到培養人類脊髓細胞的條件了!
國立陽明大學生科系暨基因體科學所碩士生陳怡君/國立陽明大學生科系暨基因體科學所副教授陳俊銘編校

 

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圖片來源:維基百科

星狀細胞(Astroctyes)為中樞神經系統中含量最多的膠質細胞。目前較為人知的功能以協助神經細胞的生長與訊息傳遞為主。近年來發現其在神經疾病、腦損傷或感染等過程午也扮演重要角色,然而星狀細胞在神經系統不同位置就有不同的特性,造成研究其功能、型態或發育過程十分困難,因此勢必需要建立體外培養的模式以利觀察與研究。

健康的個體中,能夠進行正常功能的星狀細胞為成熟不活化型,具有支持神經細胞、調節腦脊髓等功能 ; 但是當中樞神經系統受到傷害、感染或罹患疾病時,星狀細胞便會成為功能或形態上都不同的過度活化型,具有傷害神經細胞影響整個中樞神經系統的能力。因此,若欲了解星狀細胞在中樞神經系統中的角色,所建立的體外培養系統必須要能觀察並分析這兩種不同分化的星狀細胞。

體外培養人類星狀細胞的技術,目前仍尚未成熟。早期細胞來源主要取自胎兒或是成人的神經前驅細胞進行分化培養,然而來源少,且易混雜其他種類的細胞,造成研究上的困難。近年來,隨著胚胎幹細胞及誘導性多功能幹細胞( induced pluripotent stem cells; iPSC)的發展,許多學者嘗試將多功能幹細胞分化為成熟星狀細胞,這些方法不是分化時間過長就是星狀細胞無法成熟。因此本篇研究的目的即在於建立並探討如何從人類多功能幹細胞分化成「成熟不活化型」或是「過度活化型」的脊髓星狀細胞 ,以供未來研究之用。

該研究團隊一開始在小鼠胚胎幹細胞的實驗中發現,如果參照前人的技術,所分化的星狀細胞皆為未成熟的狀態。過去有文獻指出纖維母細胞生長因子 (FGFs) 可促使星狀細胞的分化,因此作者在培養後期加入纖維母細胞生長因子,結果發現星狀細胞果然有明顯成熟化的趨勢。之後嘗試以人類多功能幹細胞進行分化,他們先抑制轉型生長因子(TGF-β)下游的SMAD轉錄因子,加速神經前驅細胞生成,以縮短分化時間。接著在培養後期加入纖維母細胞生長因子,也可以成功的分化出成熟而非過度活化型的星狀細胞。

印漬術(Blotting)

印漬術(Blotting)
國立臺灣師範大學生命科學系103級莊仁奕

在分析 DNA 片段、RNA 或蛋白質時,可以透過該物質的物理性質(如大小)與化學性質(如極性)來達到分離的目的。膠體可以提供適當的孔隙大小、極性,當分析物在適當的電壓電流驅動下,其組成物會因為大小、極性等不同的物理、化學特性,而在膠體中移動上有先後快慢的差別,此種分析技術稱為膠體電泳(gel electrophoresis)。

單株抗體—HAT培養基(HAT medium)

單株抗體—HAT培養基(HAT medium)
國立臺灣大學醫學系林祐民、臺北市立建國高中劉翠華教師

關於單株抗體(monoclonal antibody)的背景與原理請參閱國科會高瞻計畫自然科學教學資源平台—單株抗體(上)單株抗體(下),本篇著重於介紹在單株抗體的細胞融合實驗中常被使用的 HAT 培養基(HAT medium)。

細胞融合是單株抗體製作過程中的一項重要技術,將 B 細胞與骨髓瘤細胞(myeloma cell)融合,融合後產生的細胞稱為融合瘤(hybridoma),融合瘤同時具有 B 細胞分泌抗體,以及癌細胞不斷分裂而不受分裂次數限制的特性。HAT 培養基即是用以培養及篩選融合瘤細胞的培養基。

劍橋參考序列 (CRS)

劍橋參考序列 (Cambridge Reference Sequence,CRS)
國立臺灣大學醫學系呂明軒、臺北市立建國高中劉翠華教師

劍橋參考序列 (Cambridge Reference Sequence,CRS)是最廣為採用的人類粒線體 DNA 序列參考標準。

英國劍橋大學桑格博士 (Dr. Fred Sanger)是生物大分子研究領域的巨擘,發明了蛋白質與核酸的定序方法,於 1958 與 1980 年兩度獲得諾貝爾化學獎的殊榮。桑格博士的團隊於 1981 年首次發表人類粒線體 DNA (mt DNA) 全長約 $$16569$$ 個鹼基對,此序列稱為劍橋參考序列。

乳糖操作組的作用機制

乳糖操作組的作用機制
國立臺灣大學生命科學系博士生 陳巧坪

生物體之基因於細胞中經轉錄及轉譯作用表現出蛋白質,並可因環境的改變進行表現量的調控,因而有了基因調節的生物現象,大腸桿菌(Escherichia coli)的乳糖操作組(lactose operon,亦稱lac operon)於 1961 年由 Monod 及 Jacob 所發現(Jacob et al., 1961),是最早發表的基因調控機制,至今仍是最為人所熟知的操作組。

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