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【陽明大學】 99-B6 以數值形態特徵分析藥物引發之粒線體形態變化-研究acetogenin是否因為細胞自我吞噬而造成的粒線體形變

Written By: admin on 五月 27, 2010 21 Comments

申請學校:陽明大學

計畫編號:99-B6

計畫名稱:以數值形態特徵分析藥物引發之粒線體形態變化-研究acetogenin是否因為細胞自我吞噬而造成的粒線體形變

領域別:生科-工程-電資

主持人:林崇智/蔡育秀

系所:生命科學暨基因體科學研究所

過去同時有文章分別報導粒線體斷裂,和粒線體腫脹,為粒線體自我吞噬(mitophagy)的目標。但是又有報導,又分別提出相反的觀察結果,造成目前進行粒線體自我吞噬的粒線體形態還不是很確定。本實驗室過去研究發現,釋迦種子的毒素Squamocin會造成細胞粒線體的總面積減少,而且同時有腫脹與斷裂的情況,但是因為缺乏粒線體自我吞噬的標誌,而無法確定哪一種粒線體的形態與粒線體自我吞噬有關。本計畫的目標為觀察Squamocin引發之粒線體型態變化,何種粒線體型態,是與粒線體自我吞噬有關。本年度首要達到的目標,為挑選出同時穩定表達紅色螢光蛋白的粒線體標誌蛋白(DsRed-mito)與綠色螢光蛋白的自我吞噬的標誌蛋白(LC3-GFP),作為本次研究的主要細胞。有此細胞株才能在活細胞中,同時觀察squamocin造成細胞中粒線體變化與自我吞噬的標誌蛋白轉移到粒線體的連續過程。為達到這個目標,參與計劃的學生首先學習如何進行細胞培養,目前已經成功地把細胞一直繼代下去,與冷凍保存。更成功地學會純化出表達DsRed-mito的質體DNA,並送入細胞中表達。在完成螢光顯微鏡操作學習後,已經成功地觀察到活細胞粒線體形態的變化。接下來,同學們的近期目標將放在如何將兩種標誌蛋白的質體送入細胞中同時表達,並將選殖出同時表現兩種標誌蛋白達到足夠螢光亮度的單株的細胞株,進行後續的研究。為了準確定量粒線體的形態,同學們開始進行手工切割粒線體圖片,作為後續訓練分析軟體進行SVM機械學習,日後能自動化切割粒線體進行形態的分類與定量。

學習細胞繼代,並學習如何操作無菌操作台

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開會討論學習成果,並討論接下來的學習方向

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